Ανάλυση PCR: τι είναι αυτό; Πώς να κάνετε σωστά τη δοκιμή PCR

Όχι πολύ καιρό πριν, ένα αξιόπιστο,μια εξαιρετικά ευαίσθητη και γρήγορη μέθοδος διάγνωσης διαφόρων μολυσματικών ασθενειών ενός ατόμου. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται "ανάλυση PCR". Τι είναι αυτό, ποια θα είναι η ουσία του, ποιοι μικροοργανισμοί μπορεί να αποκαλύψει και πώς να το παραδώσει σωστά, θα το πούμε στο άρθρο μας.

Ιστορία της ανακάλυψης

Εχει εφευρεθεί η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR)Αμερικανός επιστήμονας Cary Myullis το 1983. Αρχικά κατοχύρωσε τη μέθοδο διάγνωσης από την εταιρεία "Cetus Corporation", στην οποία εργάστηκε ο δημιουργός του. Αλλά το 1992, όλα τα δικαιώματα και τα διπλώματα ευρεσιτεχνίας πωλήθηκαν στην εταιρεία "Hoffman-La Roche". Μετά από αυτό, φάνηκε ότι διεξήχθησαν παράλληλες παρόμοιες μελέτες και καταγράφηκαν από άλλους Αμερικανούς βιολόγους, όπως η Alice Chen, ο David Edgar, ο John Treel. Το 1980, οι σοβιετικοί επιστήμονες A. Slyusarenko, A. Kaledin και S. Gorodetsky ασχολήθηκαν με αυτό το πρόβλημα. Ως εκ τούτου, ήταν αδύνατο να καθοριστεί ο μοναδικός δικαιούχος. Πολλοί εκλεκτοί βιοχημικοί έχουν συμβάλει στην ανάπτυξη της μεθόδου αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης και έχουν κατοχυρώσει με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας τις καινοτομίες τους. Προς το παρόν, η ανάλυση PCR διεξάγεται παντού σε ειδικά εξοπλισμένα εργαστήρια.

Η ουσία της διαγνωστικής μεθόδου PCR

Ανάλυση PCR: τι είναι και πώς λειτουργεί; Η ουσία της μεθόδου είναι να αυξηθεί σε ένα συγκεκριμένο μικροβιακό μέσο μέσω ενός ειδικού ενζύμου ϋΝΑ πολυμεράσης υπό τεχνητές συνθήκες. Για να γίνει αυτό, πολλαπλασιάστε το υπάρχον υλικό DNA. Έτσι, παρουσία παθογόνου μικροοργανισμού στο δείγμα, η ποσότητα του θα αυξηθεί μέσω βιοχημικών εργαστηριακών χειρισμών και το βακτήριο δεν μπορεί να ανιχνευθεί σε μικροσκόπιο.

Ανάλυση PCR - τι είναι αυτό;

Πώς διεξάγεται η υλική έρευνα;

Η ανάλυση απαιτεί:

  • Μήτρα ϋΝΑ.
  • εναρκτήρες που συνδέουν τα άκρα ενός τμήματος υλικού.
  • ένα θερμικά σταθερό ένζυμο ϋΝΑ πολυμεράσης,
  • χημικές ουσίες που εξασφαλίζουν την καλή λειτουργία των ενζύμων ·
  • ένα ρυθμιστικό διάλυμα απαραίτητο για τη δημιουργία των κατάλληλων συνθηκών για την ανάπτυξη και ανάπτυξη του υλικού DNA.

    Ανάλυση PCR 12

Για να πραγματοποιηθεί PCR, εκτελούνται 25-30 επαναλήψεις, που αποτελούνται από τρία στάδια: μετουσίωση, ανόπτηση και επιμήκυνση.

Για την ανάλυση της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσηςχρησιμοποιήστε μια ειδική συσκευή - έναν ενισχυτή. Ο σύγχρονος εξοπλισμός σας επιτρέπει να ρυθμίσετε το απαραίτητο πρόγραμμα θέρμανσης και ψύξης των σωλήνων για την εξάλειψη σφαλμάτων κατά τη διάρκεια της διάγνωσης.

Πού χρησιμοποιείται η διάγνωση;

Η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης χρησιμοποιείται σε διάφορους τομείς της ιατρικής:

  • Οι εγκληματολόγοι το χρησιμοποιούν για να αναγνωρίσουν το γενετικό υλικό, όπως τα μαλλιά, το σάλιο ή το αίμα.
  • Η ανάλυση αίματος PCR βοηθά με τον προσδιορισμό του γονότυπου, για παράδειγμα, για την ανίχνευση μιας μεμονωμένης γενετικά τροποποιημένης αντίδρασης σε ένα συγκεκριμένο φάρμακο.
  • με τη βοήθεια μιας τέτοιας μεθόδου καθιερώνουν την ύπαρξη οικογενειακών δεσμών μεταξύ των ανθρώπων.
  • η πιο δημοφιλής μέθοδος PCR έχει γίνει στην ιατρική διάγνωση για τον ορισμό διαφόρων μολυσματικών ασθενειών.

Ποιες λοιμώξεις αποκαλύπτουν την PCR;

Έτσι, η ιατρική έχει χρησιμοποιήσει μακρά και επιτυχώς την ανάλυση PCR. Τι είναι αυτό, μάθαμε ήδη. Και ποια παθογόνα μπορούν να ανιχνευθούν με αυτό; Οι ακόλουθες λοιμώδεις νόσοι διαγιγνώσκονται με PCR:

  • ηπατίτιδα Α, Β, C,
  • ureaplasmosis;
  • Candidiasis;
  • χλαμύδια.
  • μυκοπλάσμωση;
  • gardnerellez;
  • μολυσματικής μονοπυρήνωσης.
  • τριχομονάση;
  • μόλυνση από ιό θηλώματος.
  • φυματίωση;
  • μόλυνση του έρπητα του 1ου και του 2ου τύπου
  • Helicobacteriosis;
  • κυτταρομεγαλοϊό;
  • διφθερίτιδα.
  • σαλμονέλωση;
  • HIV λοίμωξη.

    Ανάλυση PCR για HIV

Επίσης, χρησιμοποιούνται μέθοδοι PCR για τη διάγνωση του καρκίνου.

Πλεονεκτήματα

Η διάγνωση PCR έχει πολλά πλεονεκτήματα:

  1. Υψηλή ευαισθησία. Ακόμη και με λίγα μόρια ϋΝΑ του μικροοργανισμού, η ανάλυση PCR προσδιορίζει την παρουσία μόλυνσης. Η μέθοδος θα βοηθήσει σε χρόνιες και λανθάνουσες ασθένειες. Συχνά σε τέτοιες περιπτώσεις, ο μικροοργανισμός δεν καλλιεργείται με άλλους τρόπους.
  2. Για τη μελέτη, οποιοδήποτε υλικό, όπως σάλιο, αίμα, φύλο, μαλλιά, επιθηλιακά κύτταρα, είναι κατάλληλο. Το πιο συνηθισμένο είναι η εξέταση αίματος και το ουρογεννητικό επίχρισμα σε PCR.

    PCR: πάρτε τη δοκιμή

  3. Δεν απαιτεί μακροπρόθεσμη καλλιέργεια. Η αυτοματοποιημένη διαγνωστική διαδικασία σας επιτρέπει να λάβετε τα αποτελέσματα της μελέτης μετά από 4-5 ώρες.
  4. Η μέθοδος είναι σχεδόν 100% αξιόπιστη. Καταγράφηκαν μόνο μεμονωμένες περιπτώσεις ψευδώς αρνητικών αποτελεσμάτων.
  5. Η δυνατότητα εντοπισμού διαφόρων τύπωνπαθογόνα από ένα μόνο δείγμα υλικού. Αυτό όχι μόνο επιταχύνει τη διαδικασία διάγνωσης της νόσου, αλλά και μειώνει σημαντικά το κόστος υλικών. Συχνά, ο γιατρός συνταγογράφει μια ολοκληρωμένη ανάλυση PCR. Η τιμή της εξέτασης, που αποτελείται από τον ορισμό έξι παθογόνων, είναι περίπου 1500 ρούβλια.

Συστάσεις για την προετοιμασία της ανάλυσης

Προκειμένου τα αποτελέσματα να είναι αξιόπιστα στη μελέτη PCR, η ανάλυση πρέπει να γίνει σύμφωνα με τις συστάσεις για την προκαταρκτική προετοιμασία διάγνωσης:

  1. Πριν εγκαταλείψετε το σάλιο, πρέπει να αποφύγετε τη λήψη τροφής και φαρμάκων 4 ώρες πριν πάρετε το υλικό. Αμέσως πριν τη διαδικασία ξεπλύνετε το στόμα σας με βραστό νερό.
  2. Οι παραπάνω κανόνες θα πρέπει να ακολουθούνται κατά τη λήψη δείγματος από την εσωτερική επιφάνεια του μάγουλου. Μετά το ξέπλυμα, συνιστάται να εκτελείται ένα ελαφρύ μασάζ δέρματος για την απομόνωση της έκκρισης του αδένα.
  3. Τα ούρα συλλέγονται συνήθως στο σπίτι. Για να γίνει αυτό, πρέπει να διεξάγετε μια ολοκληρωμένη τουαλέτα των γεννητικών οργάνων. Είναι απαραίτητο να συλλέξετε 50-60 ml ούρων σε αποστειρωμένο πλαστικό δοχείο. Για να εξασφαλιστεί η καθαρότητα του υλικού, συνιστάται στις γυναίκες να εισάγουν ένα ταμπόν στον κόλπο και οι άνδρες να τραβούν το πτυσσόμενο δέρμα. Δεν μπορείτε να πάρετε το υλικό κατά τη διάρκεια της εμμηνορροϊκής ροής.
  4. Για το σπέρμα πρέπει να αποφύγετε τη σεξουαλική επαφήΠράξη 3 ημέρες πριν τη συλλογή. Επίσης, οι γιατροί συμβουλεύουν να αρνηθούν να επισκεφθούν τη σάουνα και να πάρουν ένα ζεστό μπάνιο, να πίνουν αλκοολούχα ποτά και πικάντικα τρόφιμα. 3 ώρες πριν από τη δοκιμή, πρέπει να αποφύγετε την ούρηση.
  5. Για την παράδοση ουρογεννητικού επιχρίσματος, για παράδειγμα ανδιεξάγεται μια ανάλυση σχετικά με την PCR με τα χλαμύδια, και οι γυναίκες και οι άνδρες συνιστώνται σεξουαλική ηρεμία για 3 ημέρες. 2 εβδομάδες πριν από τη δοκιμή, δεν πρέπει να λαμβάνονται αντιβακτηριακά φάρμακα. Για μια εβδομάδα πρέπει να σταματήσετε να χρησιμοποιείτε οικεία γέλες, αλοιφές, κολπικά υπόθετα, σύριγγα. 3 ώρες πριν από τη δοκιμή, πρέπει να αποφύγετε την ούρηση. Κατά τη διάρκεια της εμμήνου ρύσεως, η συλλογή υλικού δεν διεξάγεται, μόνο 3 ημέρες μετά την διακοπή της εκκρίσεως αίματος μπορεί να λάβει ουρογεννητικό επίχρισμα.

PCR κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης

Κατά την περίοδο της προσδοκίας του μωρού πολλές μολυσματικέςΟι σεξουαλικά μεταδιδόμενες ασθένειες είναι εξαιρετικά επικίνδυνες για την κανονική ανάπτυξη του εμβρύου. Οι ΣΜΝ μπορούν να προκαλέσουν ενδομήτρια καθυστέρηση ανάπτυξης, αποβολή ή πρόωρη γέννηση, συγγενείς δυσμορφίες του παιδιού. Ως εκ τούτου, είναι εξαιρετικά σημαντικό να περάσει μια πρώιμη δοκιμή PCR. Είναι απαραίτητο να υποβάλετε την ανάλυση κατά την εγγραφή - έως και 12 εβδομάδες.

Ανάλυση επί Chlamydia PCR

Το υλικό φράχτη προέρχεται από τον αυχενικό σωλήναμε τη βοήθεια ενός ειδικού πινέλου. Η διαδικασία είναι ανώδυνη και δεν αποτελεί κίνδυνο για το μωρό. Συνήθως κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, τα χλαμύδια αναλύονται με τη μέθοδο PCR, καθώς και με ουρεαπλασμόση, μυκοπλάσμωση, κυτταρομεγαλοϊό, έρπητα και ιό θηλώματος. Ένα τέτοιο σύμπλεγμα εξετάσεων ονομάζεται PCR-6.

PCR για διάγνωση HIV

Σε σχέση με το γεγονός ότι η μέθοδος της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσηςη αντίδραση είναι πολύ ευαίσθητη στις αλλαγές στο σώμα και τις συνθήκες της διάγνωσης, πολλοί παράγοντες μπορούν να επηρεάσουν το αποτέλεσμα. Επομένως, η ανάλυση PCR για λοίμωξη HIV δεν είναι αξιόπιστη μέθοδος, η αποτελεσματικότητά της είναι 96-98%. Στο υπόλοιπο 2-4% των περιπτώσεων, η δοκιμή δίνει ψευδώς θετικά αποτελέσματα.

Αλλά σε ορισμένες περιπτώσεις χωρίς PCR διάγνωση του HIVνα μην διαχειριστεί. Συνήθως χορηγείται σε άτομα με αποτέλεσμα ψευδώς αρνητικού ELISA. Τέτοιοι δείκτες υποδεικνύουν ότι το άτομο δεν έχει αναπτύξει ακόμη αντισώματα στον ιό και δεν μπορεί να ανιχνευθεί χωρίς πολλαπλή αύξηση του αριθμού. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί με τη διεξαγωγή μιας δοκιμασίας αίματος χρησιμοποιώντας μια μέθοδο PCR.

Επίσης, αυτή η διάγνωση είναι απαραίτητη για τα παιδιά του πρώτου έτους της ζωής που γεννιούνται από θετική μητέρα HIV. Η μέθοδος είναι ο μόνος τρόπος για τον αξιόπιστο προσδιορισμό της κατάστασης ενός παιδιού.

PCR για διάγνωση ηπατίτιδας

Η μέθοδος αλυσωτής αντίδρασης πολυμεράσης επιτρέπειανίχνευση του DNA του ιού της ηπατίτιδας Α, Β, C πολύ πριν από το σχηματισμό αντισωμάτων κατά της μόλυνσης ή την εμφάνιση συμπτωμάτων της νόσου. Ιδιαίτερα αποτελεσματική είναι η ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C, καθώς σε 85% των περιπτώσεων μια τέτοια ασθένεια προχωρεί ασυμπτωματικά και χωρίς έγκαιρη θεραπεία περνά σε ένα χρόνιο στάδιο.

Δοκιμή αίματος PCR

Η έγκαιρη ανίχνευση του παθογόνου παράγοντα θα βοηθήσει στην αποφυγή επιπλοκών και παρατεταμένης θεραπείας.

Πλήρης έρευνα PCR

Σύνθετη ανάλυση PCR: τι είναι αυτό; Αυτή η αλυσιδωτή αντίδραση μέθοδος δοκιμής polimezarnoy η οποία περιλαμβάνει τον προσδιορισμό ταυτόχρονα διάφορα λοίμωξη είδη: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, τριχομονάδες, κυτταρομεγαλοϊό, ουρεόπλασμα urealitikum, έρπητα 1ου και 2ου τύπου, γονόρροια ιού θηλώματος. Η τιμή αυτής της διάγνωσης κυμαίνεται από 2.000 έως 3.500 ρούβλια. ανάλογα με τις κλινικές, τα υλικά και τον εξοπλισμό, καθώς και από το είδος της ανάλυσης: ποιοτικές ή ποσοτικές. Αυτό που είναι απαραίτητο στην περίπτωσή σας - ο γιατρός θα αποφασίσει. Σε ορισμένες περιπτώσεις, μπορείτε απλά να ανιχνεύσει την παρουσία του παθογόνου σε άλλα, όπως ο ιός HIV, το σημαντικό ρόλο που διαδραματίζει η ποσοτική τίτλο. αναφέρεται ως «ανάλυση PCR των 12» για τη διάγνωση όλων των ανωτέρω εξέταση παθογόνα.

Επεξήγηση των αποτελεσμάτων της ανάλυσης

Η αποκωδικοποίηση της ανάλυσης PCR δεν είναι δύσκολη. Υπάρχουν μόνο 2 κλίμακες της ένδειξης - "θετικό αποτέλεσμα" και "αρνητικό αποτέλεσμα". Εάν ανιχνευθεί παθογόνο, οι γιατροί μπορούν να επιβεβαιώσουν την ύπαρξη της νόσου με 99% εμπιστοσύνη και να προχωρήσουν στη θεραπεία του ασθενούς. Στην ποσοτική μέθοδο προσδιορισμού της μόλυνσης στην αντίστοιχη στήλη, θα υποδειχθεί η αριθμητική τιμή των ανιχνευόμενων βακτηριδίων. Μόνο ένας γιατρός μπορεί να καθορίσει το βαθμό της νόσου και να συνταγογραφήσει την απαραίτητη θεραπεία.

Πού πρέπει να περάσει η ανάλυση PCR;

Σε ορισμένες περιπτώσεις, για παράδειγμα, στον προσδιορισμόΗ λοίμωξη από τον ιό HIV με τη μέθοδο PCR, με αρνητικό αποτέλεσμα, καθίσταται αναγκαία η διεξαγωγή πρόσθετων εξετάσεων για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων.

Πού πρέπει να γίνει η ανάλυση;

Πού να υποβληθεί η ανάλυση PCR: στο κράτος πολυκλινικό ή σε ιδιωτικό εργαστήριο; Δυστυχώς, στα δημοτικά ιατρικά ιδρύματα ο εξοπλισμός και οι μέθοδοι είναι συχνά ξεπερασμένοι. Ως εκ τούτου, είναι καλύτερο να προτιμάτε ιδιωτικά εργαστήρια με σύγχρονο εξοπλισμό και προσωπικό υψηλής εξειδίκευσης. Επιπλέον, σε μια ιδιωτική κλινική θα έχετε αποτελέσματα πολύ πιο γρήγορα.

Στη Μόσχα, πολλά ιδιωτικά εργαστήρια προσφέρουνδιεξαγωγή ανάλυσης PCR σε διάφορες λοιμώξεις. Για παράδειγμα, σε κλινικές όπως Vita, Complex Clinic, Happy Family και Uro-Pro, πραγματοποιείται ανάλυση PCR. Η τιμή της εξέτασης είναι από 200 ρούβλια. για τον ορισμό ενός παθογόνου παράγοντα.

Μπορούμε να συμπεράνουμε ότι η διάγνωση μολυσματικώνΗ PCR στις περισσότερες περιπτώσεις είναι ένας γρήγορος και αξιόπιστος τρόπος ανίχνευσης του παθογόνου στο σώμα κατά τα πρώτα στάδια της μόλυνσης. Αλλά σε ορισμένες περιπτώσεις αξίζει να επιλέξουμε άλλες μεθόδους διάγνωσης. Η ανάγκη διεξαγωγής μιας τέτοιας μελέτης μπορεί να καθοριστεί μόνο από έναν ειδικό. Η αποκωδικοποίηση της ανάλυσης PCR απαιτεί επίσης μια επαγγελματική προσέγγιση. Ακολουθήστε τις συστάσεις του γιατρού και μην παραδώσετε τις εξετάσεις που δεν είναι απαραίτητες.

Αρέσει:
0
Ουροποιητική ανάλυση από τον Νετσιπόρενκο. Πώς να το συναρμολογήσετε
Γενική ανάλυση των ούρων. Πώς να πάρετε και ποιο είναι το πρότυπο;
Πώς εξετάζεται το απόκρυφο αίμα των κοπράνων;
Πού να πάρετε το τσιμπούρι για ανάλυση; Τι να κάνετε όταν
Πόσο σωστά πρέπει να παραδώσει την ανάλυση ενός περιττώματος και αν είναι απαραίτητο
Πώς να κάνετε σωστά το αίμα στις ορμόνες;
Μπορεί να γίνει εξέταση αίματος για HIV
Πώς να υποβάλλετε σωστά τα τεστ ούρων;
Τι θα πει η ανάλυση ούρων (αποκωδικοποίηση)
Δημοσιεύσεις
επάνω